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2021-07-27

Westernblot實驗過程中常見問題匯總及處理方案。1、westernblot的優點及缺點答：優點：靈敏，特異性高，常規可達ng級，Ecl顯色法理論上可達pg級。缺點：通量有限。2、為什么我的細胞提取液中沒有目標蛋白？答：原因有很多：首先排除WB過程是不是抗體的問題，重新實驗、更換抗體；其次排除蛋白是否降解，提取的時候需要加入蛋白酶抑制劑，a)你的細胞中不表達這種蛋白質，換一種細胞；最后考慮此種細胞是否表達該蛋白，表達量高低。3、提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？答...

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染色質免疫共沉淀（ChIP）

2021-07-27

染色質免疫沉淀（chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP）是目前研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法。它的基本原理是在活細胞狀態下固定蛋白質－DNA復合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過免疫學方法沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。ChIP不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。而...

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分子生物學常用數據庫匯總及推薦

2021-07-27

分子生物學主要研究具體生物大分子在某一生物學行為過程中的表達變化、功能和作用方式；主要涉及基因的表達調控、蛋白相互作用、信號分子間的交互對話等。分子生物學實驗常需要我們在具體實驗前對所關注的基因的一些基本信息、可能受哪些因素調控、與哪些分子可能存在潛在的相互作用，可能參與哪些生物學行為等進行一些初步的判斷，然后根據這些信息，提出合理的實驗設計，并通過生物學實驗加以驗證。那么，如何獲得上面的這些信息，除了根據實驗結果提供的線索和深入研究相關文獻以外，還會用到一些分子生物學數據庫...

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逆轉錄PCR

2021-07-26

RT-PCR，逆轉錄PCR或稱反轉錄PCR（ReverseTranscriptionPCR），是聚合酶鏈式反應的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，RNA在逆轉錄酶的作用下被逆轉錄成為互補DNA（complementaryDNA，cDNA），再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。基本原理：用逆轉錄酶以RNA為模板合成與其互補的DNA（cDNA）的過程。因為mRNA末端存在PolyA，所以用OligodT作為通用引物與其互補。商品化的反轉錄試劑盒里通常除了OligodT之外，...

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防爆冰箱了解多少？

2021-07-23

對于冰箱，我們并不陌生，現在幾乎家家戶戶都有冰箱，這是一種常用家電，而防爆冰箱主要應用在石油、化工、軍事、醫藥、科研、實驗室等領域，屬于特種冰箱。實驗室防爆冰箱用于儲存易燃、易爆、易蒸發、易腐蝕等化學試劑、實驗試劑等，適用于高校各實驗室、科研單位的實驗場所等，就是為了防止爆炸引起的人員或者財產上的損失。美菱生物醫療2~8℃防爆冰箱產品特點：全面防靜電：箱殼與內襯、門殼及門內襯均采用銅絞線連接，存儲空間內各活動部件均為金屬制作。多種防爆方式：整機防爆，采用隔爆型、本質安全型及澆...

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實驗室純水等級分類及應用

2021-07-23

通常我們會將實驗室的純水分為四個不同的等級，按照級別分為：純水、去離子水、實驗室Ⅱ級純水以及超純水。這四類不同的純水通常根據電導率來進行區分和檢測。1、純水純水也叫純化水，它的電導率會在1-50μs/cm之間，它可經由單一弱堿性陰離子交換樹脂、反滲透或單次蒸餾制成。一般應有在玻璃器皿清洗、清洗劑用水、恒溫恒濕實驗室和高壓滅菌器之間。2、去離子水去離子水的電導率通常都在1.0-0.1μs/cm之間，通過采用含強陰離子交換樹脂的混床離子交換制成。它們能夠滿足各種制備試劑、稀釋樣品...

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培養細胞那些事

2021-07-22

養細胞這件事兒，看似簡單，然而卻常常因為各種原因，讓我們珍貴的實驗細胞一再受損或者死亡，今天為大家講述細胞從復蘇、傳代到凍存等一系列過程及常遇到的那些你可能忽略的小卻重要的細節。一、細胞的營養來源針對大多數腫瘤細胞，營養配方一般為：90%合成培養基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS)；為了防止污染，可以加1%雙抗！不同細胞的培養基是不同的。一般ATCC購買的細胞，針對不同細胞株，會有詳細介紹，包括生長的狀態圖、培養基的類型等。培養基一般都是偏紅色...

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