厭氧菌在有氧環境中無法生長，因此需要無氧環境。為了創造這種環境，通常會在培養基中加入還原劑，或者通過物理和化學方法去除環境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。以下是幾種常見的厭氧菌培養方法：
皰肉培養基法 
這是簡單的厭氧培養方法之一，不需要特殊設備。將皰肉和肉湯裝入大試管中，液面用凡士林封閉，從而創造無氧環境。使用前，將裝有培養基的試管放入沸水浴中加熱10-20分鐘，以釋放溶解氧。
厭氧罐法 
這是一種應用廣泛的方法，通過物理化學法在罐內創造厭氧環境。厭氧罐法分為兩種：
抽氣換氣法 
適用于一般實驗室，經濟實惠且能迅速建立厭氧環境。標本接種后，將平板放入厭氧罐中，擰緊蓋子，用真空泵抽出罐中空氣，使壓力真空表至-79.98KPa。停止抽氣后，充入高純氮氣使壓力真空表指針回0位。連續反復3次，在罐內-79.98KPa情況下，充入70%N2、20%H2、10%CO2（或20%CO2、80%H2）。罐中放入冷催化劑鈀粒，催化罐中殘余O2和H2化合成水。罐中放美藍指示管，有氧呈藍色，無氧紅色。臨用前將美藍煮沸使變無色，放入罐中先呈淺藍色，待罐中無氧環境形成，美藍即持續無色。
氣體發生袋法 
袋由錫箔密封，含有兩種藥片，枸椽酸和重碳酸氫鈉，另一種含有硼氫藥片。前者遇水放出二氧化碳，后者可釋放氫。使用時在袋右上角剪一小口，灌進10mL蒸餾水，立即放入含有鈀粒、指示劑及平板培養基的厭氧罐中，擰緊蓋2-3分鐘蓋子微熱并少量水蒸氣出現。密封1小時左右罐中O2含量可低于1%。
厭氧袋法 
即在塑料袋內創造厭氧環境來培養厭氧菌。該方法適用于實驗室或外出采樣、現場接種等。原理與氣體發生袋法相同，只是采用塑料袋代替了厭氧罐。氣袋為一透明而密閉的塑料袋，內裝有氣體發生管（有硼氫的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。首先將接種的平板培養基放入袋中，擠出袋內空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發生管，20分鐘后再折斷美蘭指示劑管，如果指示劑不變藍色，說明袋內達厭氧狀態，即可放入37℃進行培養。
厭氧手套箱法 
這是一整套系統，是最佳厭氧菌培養方法，通常用于厭氧細菌的大量培養研究。厭氧手套箱是一個密閉的大型箱，前部是有機玻璃面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內操作。厭氧手套箱可調節溫度，本身是孵育箱或孵育箱即附在內，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌落。使用時應嚴格遵守操作規程，保證箱內氣體比例合理。

1. 氫氣

氫氣是厭氧培養箱中常用的氣體之一。它可以束縛氧氣，創造無氧條件。同時，氫氣還可促進細菌進行呼吸代謝，使其更適應于厭氧環境。需要注意的是，氫氣是易燃易爆的氣體，所以在使用時一定要注意安全。

2. 二氧化碳

二氧化碳在厭氧培養箱中也是常用的氣體之一。它可以調節培養液的pH值和緩沖作用，提供相對穩定的環境。此外，二氧化碳還與氫氣相互作用，形成二氧化碳氣氛，進一步保證厭氧生長環境。

3. 氮氣

氮氣在厭氧條件下不會引入氧氣，使得細菌可以在消耗體外溶氧之后繼續生長。此外，氮氣通過對壓力進行調節，負責維持厭氧培養箱中的壓力范圍。

1. 氣體的純度必須得到保證，否則細菌不僅不能正常生長，還可能受到有害物質的影響。

2. 氣體的使用量、比例和時間等參數必須嚴格控制，以免對生長環境產生負面影響。

3. 氣體的供應管路必須檢查是否暢通，以保證氣體可控。

4. 在使用氫氣時，必須注意安全。使用前應進行漏氣檢測，并嚴格遵守操作規程。

5. 在操作過程中需要注意無菌技術，以免細菌污染。